Reveal^®2.0沙門氏菌檢測系統(tǒng)

不用時將檢測條儲存在15-30^oC，將干粉培養(yǎng)基儲存在室溫下（15-30^oC）

主要用途

    Reveal^®沙門氏菌檢測系統(tǒng)可用于快速鑒定食品及，物飼料和環(huán)境樣品中沙門氏菌，完成對沙門氏菌的檢測和初步鑒別只需要24小時。

測試原理

本系統(tǒng)利用REVIVE培養(yǎng)基，它能夠為沙門氏菌提供易利用的營養(yǎng)成分，以及其它對受脅迫或損傷狀態(tài)下的沙門氏菌進行恢復(fù)的必要因子。用REVIVE培養(yǎng)后，選擇性富集培養(yǎng)可使沙門氏菌生長到能夠被Reveal檢測條檢出的水平。Reveal檢測詳述如下:

對于一些樣品，初的非選擇性培養(yǎng)可以饒過，直接將樣品引進到RV培養(yǎng)基中。

對于那些非常黏稠，含色素，或者包含水平無法生活細胞的樣品，可選擇的第三種富集方法能夠檢測到其含有的沙門氏菌。在食品工業(yè)中，使用M肉湯培養(yǎng)是幾種的確定標準程序中的好選擇。

將少量富集培養(yǎng)物（120μl）放到樣品杯中，將檢測條浸入到樣品并在環(huán)境溫度下保持15分鐘。樣品通過毛細管作用滲過含特異性沙門氏菌抗體（與膠體金顆粒相偶聯(lián)）的試劑區(qū)。如果樣品中存在抗原（即沙門氏菌），它將與膠體記的抗體結(jié)合。該抗原-抗體復(fù)合物滲過試劑區(qū)，經(jīng)過含有沙門氏菌抗體（分布呈帶狀）的硝化纖維膜。該含金免疫復(fù)合物被捕獲并聚集在這個區(qū)域，從而顯示一條可見的線。剩余的樣品繼續(xù)遷移而進入位于膜末端的廢液貯存處。

試劑區(qū)也含有針對廣譜抗原的金復(fù)合物（指示劑），無論沙門氏菌存在與否，它都會被樣品溶液釋放。膠體金復(fù)合物對照指示劑通過膜遷移到陰性對照捕獲區(qū)（含針對廣譜抗原的抗體區(qū)），捕獲并集結(jié)成一條可見線。無論沙門氏菌抗原存在與否，都會在質(zhì)控區(qū)形成對照線，以檢測過程操作正確無誤。

主要使用者

    Reveal 2.0沙門氏菌測試系統(tǒng)旨為熟悉沙門氏菌分離與鑒定中無菌操作技術(shù)的人員而設(shè)計的。建議不具備微生物基礎(chǔ)知識的使用者參加Neogen公司的技能培訓(xùn)。

提供的材料

      Reveal檢測條

      20個沙門氏菌檢測條

      20個移液管

      20個反應(yīng)杯

      REVIVE培養(yǎng)基

      20瓶REVIVE培養(yǎng)基

      20個培養(yǎng)袋

      量杯

      二次選擇性培養(yǎng)基

      20裝2倍濃縮的RV培養(yǎng)基（2×RV）

      20個培養(yǎng)袋

量杯

     直接選擇培養(yǎng)基

      20瓶1×RV培養(yǎng)基

      20個培養(yǎng)袋

量杯

試劑盒不提供的必需品

天平（小刻度25g）

計時器

樣品杯架

無菌水

能保持36^oC及42^oC的培養(yǎng)箱

可選擇的設(shè)備

Reveal AccuScanⅢ 讀數(shù)儀器

均質(zhì)器 

儲藏

    不用時，檢測條應(yīng)儲存于15-30℃；干粉培養(yǎng)基儲存在室溫下（15-30℃）。

不同物品的檢測

本產(chǎn)品可有效地用于許多物品中沙門氏菌的檢測。還可從Neogen公司獲得，本產(chǎn)品進行沙門氏菌檢測的物品明細表，同時備有對于不同物品檢測時的富集方法。

警惕

1 不要使用過期的培養(yǎng)基

2 打開裝檢測條的瓶子前，讓檢測條升至室溫

3 使用水化培養(yǎng)基須在6小時內(nèi)準備

4 培養(yǎng)時間和溫度尤為重要，否則會導(dǎo)致錯誤結(jié)果

5 在培養(yǎng)過程中樣品袋不能扎得過緊，以便于空氣交換；這對沙門氏菌生長及抗原表達至關(guān)重要

6 水化REVIVE培養(yǎng)基時無菌水應(yīng)該升至42^oC，水化RV培養(yǎng)基時無菌水應(yīng)是36^oC

7 選擇性富集的培養(yǎng)物的檢測應(yīng)在培養(yǎng)后的6小時內(nèi)完成

8采用良好微生物實驗室操作規(guī)程

1 樣品準備及預(yù)培養(yǎng)

  樣品富集1—適用于大多數(shù)食品和環(huán)境樣品

1 將1瓶REVIVE培養(yǎng)基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養(yǎng)基（9708）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。

3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進合適的架子或支撐物，36±1℃培養(yǎng)4小時

4將1瓶濃縮的2×RV培養(yǎng)基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至36℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃

5將REVIVE培養(yǎng)袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上

6向樣品袋內(nèi)（共200ml）加入200ml預(yù)熱到42℃的預(yù)先制備的選擇性RV培養(yǎng)基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻

7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養(yǎng)16-24小時

樣品富集2—適用與挑選的食品，包括生的碎牛肉，生的碎家禽肉，生海鮮，家禽沖洗水

1將1瓶1×RV培養(yǎng)基（9729）或者5.3g大瓶裝的Rv培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有1×RV培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。

3松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養(yǎng)20-24小時

樣品富集3—適用與潛在的困難樣品，包括干的寵物食品，高黏性或者高色素原料

1 將1瓶REVIVE培養(yǎng)基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養(yǎng)基（9708）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養(yǎng)基的培養(yǎng)袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確?；靹颍?/span>參考辦法：將袋子放到均質(zhì)器內(nèi)，用正常速度下混勻30秒鐘。

3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進合適的架子或支撐物，36±1℃培養(yǎng)4小時

4將1瓶濃縮的2×RV培養(yǎng)基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養(yǎng)基（9716）倒入培養(yǎng)袋中，加入200ml預(yù)熱至36℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃

5將REVIVE培養(yǎng)袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上

6向樣品袋內(nèi)（共200ml）加入200ml預(yù)熱到42℃的預(yù)先制備的選擇性RV培養(yǎng)基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻

7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養(yǎng)16-24小時

8加入10ml 36℃的無菌水到1瓶M肉湯培養(yǎng)基（9722）中，握緊搖動來溶解該培養(yǎng)基

9移取1ml REVIVE/RV的培養(yǎng)液到溶解的M-肉湯內(nèi)

10 36^oC培養(yǎng)下6小時

檢測條檢測過程

   1. 從培養(yǎng)箱中取出樣品袋，混勻，取200ul或者8滴到樣品杯中

2. 從裝檢測條的瓶中取出沙門氏菌檢測條

3. 將檢測條按箭頭向下端浸入到有樣品的樣品杯中，放置15分鐘

4 . 15分鐘后讀取結(jié)果

• 結(jié)果的解釋

外觀表現(xiàn)                                                  

15分鐘內(nèi)在質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)都出現(xiàn)顯色線，結(jié)果為陽性；

15分鐘時只有質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)顯色線，結(jié)果為陰性；

如果質(zhì)控區(qū)沒有顯色線，則檢測無效，需要用另一個檢測條檢測；

超過20分鐘讀取結(jié)果是不正確的；

可選擇的電子解釋

根據(jù)Reveal AccuScan儀器說明書的操作，將檢測條放到該儀器上，觀察屏幕提示讀取并記錄結(jié)果

說明： 如果沙門氏菌存在，檢測條上的檢測區(qū)會形成一條明顯的線，線深淺的程度與沙門氏菌的血清變型或含量有關(guān)，如果出現(xiàn)明顯可見的線條，不管深淺如何，樣品都將視為陽性。

從RV培養(yǎng)基中遷移出來任何藍色到檢測條中都不影響結(jié)果。

• 確認

建議用Reveal富集培養(yǎng)初步鑒定為陽性的樣品應(yīng)該采用BAM或者BLG中的涂布平板法確認。

說明： 用BAM或MLG方法檢測一個“復(fù)制”的“亞樣品”的結(jié)果并不一定與Reveal檢測的結(jié)果一致！細菌并不是均勻的分布于樣品中（對于固體或干的樣品更是如此），因此，復(fù)制的亞樣品可能不含有沙門氏菌。

用品的處理

按照當?shù)刂莼蚵?lián)邦政府實施的所有相關(guān)規(guī)定處理（高壓滅菌或漂白粉漂白等方法處理）Reveal檢測裝置，移液管，培養(yǎng)基等。