1 前言 近年來，越來越多的研究結(jié)果表明，磺胺類藥物特別是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、 磺胺甲基異惡唑等殘留對人體的危害主要表現(xiàn)為“致癌、致畸、致突變”作用，引起過敏、 中毒和導致耐藥性菌株產(chǎn)生，以及引起造血系統(tǒng)障礙、急性溶血性貧血、粒細胞缺乏癥、再 生障礙性貧血等。因此，加強磺胺殘留的檢測及監(jiān)控是控制獸藥殘留發(fā)生的重要措施之一。

2 儀器與試劑

2.1 儀器 SPE400 全自動機械臂固相萃取儀；高效液相色譜儀；絞肉機；均質(zhì)機；離心機；旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀；濾膜（有機相，0.22μm）

2.2 試劑及耗材 乙酸乙酯（色譜純）、鹽酸溶液（0.1mol/L）、正己烷、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜 純）、甲酸（色譜純）、氨水 MCX 固相萃取柱，3ml，填充物 60mg 50%甲醇乙腈溶液：取甲醇 50mL，用乙腈溶液并稀釋至 100mL 氨化甲醇洗脫液：取氨水 5mL，用甲醇溶解并稀釋至 100mL 0.1%甲酸溶液：取甲酸 1mL，用水溶解并稀釋至 1000mL 0.1%甲酸乙腈溶液：取 0.1%甲酸 830mL，用乙腈溶解并稀釋至 1000mL SPE-03-2019 07 2

3 實驗方法

3.1 實驗步驟

3.1.1 取樣 取適量新鮮或解凍的供試組織，采用絞肉機絞碎均質(zhì)后備用。

3.1.2 提取 稱取均質(zhì)好的試樣 5g 于聚四氟乙烯離心管中，加入乙酸乙酯 20mL，搖動 5min，將 試樣分散開，在 4000r/min 下離心 5min，取上層清液與 10mL 于錐形瓶中；殘渣中再加入 20 mL 乙酸乙酯，重復抽提一次，合并兩次提取液。

3.1.3 脫脂 在提取液中加 0.1mol/L 鹽酸溶液 4mL，于 40℃下蒸發(fā)至少于 3mL，轉(zhuǎn)入 10ml 離心管中。 用 0.1mol/L 鹽酸溶液 2mL 洗錐形瓶并轉(zhuǎn)至同一離心管中，再用正己烷 3mL 洗錐形瓶，再將 正己烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，晃動離心管將其混合均勻，在 3000r/min 下離心 5min，棄去正己 烷。再次用正己烷 3mL 洗錐形瓶，轉(zhuǎn)至同一離心管中，搖晃離心管將樣品在溶劑中混合均勻， 在 3000r/min 下離心 5min，棄去正己烷。取下層液備用。 SPE-03-2019 07 3

3.1.4 固相小柱凈化 過程 試劑名稱 用量 速度 等待時間 空氣助推 次數(shù) 活化 甲醇 2mL 3mL/min 0s 2mL 1 鹽酸（0.1mol/L） 2mL 3mL/min 0s 2mL 1 上樣 2mL 1mL/min 0s 2mL 1 淋洗 鹽酸（0.1mol/L） 1mL 3mL/min 0s 2mL 1 甲醇乙腈（50%） 2mL 3mL/min 0s 2mL 1 洗脫 氨化甲醇 4mL 3mL/min 5s 2mL 1 將洗脫液于 40℃氮氣吹干，加 0.1%甲酸乙腈溶液 1mL 溶解殘余物，濾膜過濾，供高效 液相色譜測定。

3.1.5 色譜測定條件 色譜柱：C18 流動相：0.1%甲酸+乙腈 流速：1mL/min 柱溫：30℃ 檢測波長：270nm SPE-03-2019 07 4 進樣體積：100uL 流動相梯度洗脫條件 時間/min 0.1%甲酸/% 乙腈/% 0.0 83 17 5.0 83 17 10.0 80 20 22.3 60 40 22.4 10 90 30.0 10 90 31.0 83 17 48.0 83 17

3.1.6 標準曲線制備 精密量取 10ug/mL 磺胺類藥物混合標準工作液適量，用 0.1%甲酸乙腈溶液稀釋，配置成 濃度為 10、50、100、250、500、和 5000ug/L 的系列混合標準溶液，供高效液相色譜測定。 以測得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關 系數(shù)。

3.1.7 測定 將樣品按照與標準曲線繪制時相同的色譜條件進行測試，得到樣品色譜峰的峰面積。根 據(jù)所得的標準曲線，計算樣品中磺胺類藥物的濃度。 SPE-03-2019 07 5

4 結(jié)果與討論

4.1 活化、上樣、淋洗步驟中所用到的試劑以設置的速度進入固相小柱后均可以以較快的速 度流出，無需設置等待時間，只需設置一較小體積的空氣助推將殘留在管路里的少量試劑完 全推出即可。

4.2 洗脫步驟里因洗脫液流出小柱較為緩慢需設置一段等待時間，以足量的洗脫液可以 充分將目標物洗脫。

4.3 結(jié)論 用固相萃取法凈化豬肉中磺胺類藥物殘留的過程實現(xiàn)自動化，減少人力的消耗，實驗過 程中使用的有機溶劑采用密封處理，降低了對人體的傷害且儀器能的控制活化、上樣、 淋洗、洗脫等溶劑流速，使樣品凈化的更為充分。

參考文獻 [1] GB 29694-2013 食品安家標椎 動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液 相色譜法.

注意事項 樣品液蒸發(fā)至 2mL 左右轉(zhuǎn)移至 10mL 離心管后，需用國標中規(guī)定的試劑充分洗滌錐形瓶， 并將洗液一同倒入離心管。經(jīng)提取和脫脂后備用的下層液約為 3mL 左右，將其從離心管轉(zhuǎn)至 樣品管后，需用 3mL 鹽酸溶液（0.1mol/L）對離心管進行潤洗，洗液一并倒入樣品管，供后 續(xù)凈化。